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穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)應(yīng)選擇同位素豐度>98%以上的標(biāo)準(zhǔn)品

更新時(shí)間:2022-08-25   點(diǎn)擊次數(shù):605次
  穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)記化合物與對(duì)應(yīng)的未標(biāo)記化合結(jié)構(gòu)相似,所以理化性質(zhì)也極為相似,如果將穩(wěn)定同位素標(biāo)記物與對(duì)應(yīng)的未標(biāo)物用同樣的色譜方法檢測(cè),其保留時(shí)間也幾乎一致,無法分辨。且穩(wěn)定同位素不具有放射性,無論在標(biāo)記化合物合成、分離提純及應(yīng)用過程中均無特殊防護(hù)要求,可作為內(nèi)標(biāo)用于臨床醫(yī)學(xué)研究及生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)、食品檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
  如何挑選穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)?
  1、應(yīng)盡量選擇同位素豐度>98%以上的標(biāo)準(zhǔn)品。
  2、如果選擇氘代產(chǎn)品作為內(nèi)標(biāo),需選擇質(zhì)量差大于3(D3)以上的產(chǎn)品。
  3、13C,15N通常標(biāo)記在分子的骨架結(jié)構(gòu)上,其標(biāo)記位點(diǎn)較為穩(wěn)定,氘代產(chǎn)品容易與液相流動(dòng)相溶劑中的活潑氫發(fā)生交換,因此穩(wěn)定性不如13C,15N。如圖3,草甘膦如果用D標(biāo)記的話,羧基、亞氨基、羥基上面的D都屬于活潑位點(diǎn),很容易脫離母體化合物,所以安譜實(shí)驗(yàn)選擇13C,15N來進(jìn)行標(biāo)記。另外考慮到氘標(biāo)記物的合成較為簡(jiǎn)便,價(jià)格便宜,因此在氘標(biāo)記物能夠滿足實(shí)驗(yàn)需求的情況下,也常選用氘標(biāo)記物作為內(nèi)標(biāo)物。
  4、標(biāo)記位點(diǎn)還應(yīng)遠(yuǎn)離容易發(fā)生化學(xué)鍵斷裂的位置,以避開同位素效應(yīng)的影響。在質(zhì)譜中鄰苯二甲酸二甲酯的酯基容易斷裂,所以安譜實(shí)驗(yàn)選擇氘標(biāo)記在苯環(huán)上。如果母體化合物因化學(xué)鍵斷裂同時(shí)生成2個(gè)重要子單元結(jié)構(gòu)化合物,可選擇雙標(biāo)記母體化合物。
  穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)是質(zhì)譜方法,沒有別的臨床檢測(cè)方法用到同位素內(nèi)標(biāo)。比如光吸收和免疫的方法,都無法分辨出被檢測(cè)物和同位素內(nèi)標(biāo)的區(qū)別,因?yàn)樗鼈兊睦砘再|(zhì)太接近了。如果真的加進(jìn)內(nèi)標(biāo),那測(cè)出來的值肯定大大的偏高。只有質(zhì)譜才能把同位素內(nèi)標(biāo)和要檢測(cè)的物質(zhì)分得開,雖然它們的差別只有幾個(gè)道爾頓?,F(xiàn)在的內(nèi)標(biāo)基本都是穩(wěn)定同位素標(biāo)記的,最常見的是D和13C。同位素內(nèi)標(biāo)和被檢測(cè)物是同一個(gè)物質(zhì),但是其中的幾個(gè)氫原子被氘所取代,或者是12C換成了13C,理化性質(zhì)基本不變。

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